¿Cómo puedo mejorar la forma de pico de mi compuesto básico cuando trabajo con una columna C18 vieja de sílice tipo A?

Cuando se lanzaron las primeras columnas de fase reversa en base sílice "tipo A", estos materiales tenían una contaminación sustancial de metales, lo que hacía que los grupos silanoles en la superficie de la sílice tuvieran una actividad mayor y más variable. Los fabricantes mejoraron los materiales lo máximo posible mediante enlaces con grupos C18, en un intento de reducir el número de centros activos donde podría tener lugar el intercambio iónico. Sin embargo, los compuestos básicos generalmente presentaban colas. Algunos enfoques adoptados por los cromatografistas para reducir esto incluyen:

Trabajando a pH bajo, este enfoque tiene como objetivo neutralizar los grupos silanoles de la superficie de sílice, evitando que se produzca el intercambio iónico. Un tampón fosfato 10-20 mM, pH 2.5 es ideal para este propósito, aunque se debe tener cuidado si se usa acetonitrilo como solvente orgánico, para evitar precipitar fosfato si se analiza en gradiente.

Añadiendo una base competitiva (o supresor de silanol) a la fase móvil, normalmente se usarían reactivos como TEA (trietilamina) a una concentración de 5 mM. La idea aquí es que la base competitiva se asocie con los grupos de silanol, reduciendo su disponibilidad para interactuar con los analitos. Este enfoque, aunque exitoso, generalmente conduce a una vida útil de la columna más corta, ya que los supresores de silanol también tienden a causar una fase estacionaria más rápida de la columna y una hidrólisis del encapping, lo que a su vez expone más sílice, permitiendo que se produzcan más colas.

Peak 2 – benzylamine, run at pH 2.5 on a type A silica C18 column

Benzodiazepams run at pH 3.0 on a type A silica C18, but with the addition of TEA to improve peak shape

Fuente: Blog Phenomenex