La boca y saliva humana contienen hasta 9 billones de bacterias de unas 700 especies diferentes, que producen ácidos similares a las bacterias entéricas, las cuales tienen un efecto dañino en el tejido periodontal y también en la mantención del ambiente dentro de la boca. El Análisis de Metaboloma es una técnica que ha ganado popularidad para el análisis exhaustivo de metabolitos de bajo peso molecular, tales como los aminoácidos y ácidos orgánicos que surgen de la actividad celular para revelar diferencias entre múltiples muestras.
Un análisis exhaustivo es más fácil de realizar mediante un estudio de Metaboloma, comparado con otro tipo de análisis ómico, debido al relativamente bajo número de analitos de interés. Es así como un Análisis de Metaboloma de la saliva puede ser realizado utilizando la Cromatografía Líquida con Espectrometría de Masas (LC-MS) de alto rendimiento.
La saliva es conocida por contener tanto bacterias orales como los metabolitos producidos por ellas. Las condiciones bajo las cuales la saliva es almacenada antes del análisis, puede también afectar la cantidad de metabolitos presentes en la muestra, debido a la actividad de estas bacterias. El Análisis de Metaboloma también puede ser usado para investigar los efectos de la temperatura de almacenamiento en los metabolitos en la saliva.
La saliva obtenida de un adulto sano se centrifuga a 12000 rpm por 10 minutos. El resultado flotante se divide en cuatro microtubos y almacenado a diferentes temperaturas de -80, 4, 25 y 40°C respectivamente, por tres días previos al análisis. Como pretratamiento para los ácidos grasos y orgánicos, las muestras fueron derivatizadas con nitrofenilhidrazina, para mejorar la retención de ODS en la columna, así como la sensibilidad de detección en la Espectrometría de Masas. Este y otros aditivos son añadidos a temperatura ambiente y reaccionaron por 30 minutos, luego de esto, la saliva se disuelve con una solución con metanol que contiene ácido fórmico.
Al analizar las muestras de saliva se detectaron seis ácidos grasos de cadena corta y 14 ácidos orgánicos. El análisis simultáneo detectó 50 componentes, los que eran principalmente aminoácidos, ácidos orgánicos y metabolitos nucleósidos.
La temperatura de almacenado efectivamente tuvo un efecto en los resultados, la saliva guardada a 40°C se distinguió por la presencia de ácido succínico y glutámico. La almacenada a 25°C en cambio contenía ácido pirúvico, histidina y tirosina. Las muestras almacenadas a 4°C y -80°C tendieron a contener los mismos ácidos grasos de cadena corta, orgánicos, aminoácidos y metabolitos nucleósidos.
Fuente: Cromtek
