Carne, lácteos, pescado, miel y otros productos de origen animal deben someterse a un monitoreo de rutina para detectar posibles residuos de medicamentos usados para combatir enfermedades en los animales, pero que pueden ser dañinos para las personas. Un uso excesivo o inadecuado de antimicrobianos puede causar excesiva resistencia y así reducir la capacidad de combatir infecciones propiamente humanas. Además, la exposición sostenida a tales drogas puede tener un efecto tóxico, afectar la reproducción y causar cáncer.
A continuación se presentan los requisitos instrumentales y los resultados esperables del test iMethod™ para monitoreo de antibióticos, utilizando un sistema LC-MS/MS QTRAP® 4000 a través de un flujo de trabajo con barrido realzado de ion producto disparado por una transición MRM, aplicable a una biblioteca para confirmación.
El test iMethod™ monitorea diferentes clases de antibióticos: betalactamas, tetraciclina, sulfonamida, macrólidos, fenicol, fluoroquinolona, flunixina, entre otros. En la Tabla 1 se muestra la lista completa de compuestos. El método alcanza una sensibilidad máxima ya que utiliza ambos modos de obtención, tanto ion positivo como ion negativo. Incluye un catálogo MRM de 93 compuestos (hasta 3 transiciones por cada uno) que se puede utilizar para configurar pruebas personalizadas de monitoreo o cuantificación.
Como ejemplo se incluyen protocolos de preparación de muestras de jugo de riñón, suero, leche y miel, que consisten en homogenización, extracción con acetonitrilo, extracción en fase sólida, centrifugación y filtración, con una inyección del agua.
La separación consiste en el uso de un gradiente de metanol y agua con ácido fórmico en una columna Phenomenex Gemini C18. En la Figura 1 se presenta un cromatograma como ejemplo de la separación lograda.
Figura 1 – Cromatograma de una solución de mezcla de estándares de antibióticos (a 200 ng/mL) obtenido con un sistema LC/MS/MS QTRAP® 4000
Tabla 1 – Lista de compuestos en el test iMethod™ para monitoreo de antibióticos (Versión 1.1 del catálogo MRM). Para los compuestos en azul se utiliza el modo negativo
Requisitos de sistema
Para utilizar este método tal como se explicó, se necesitan los siguientes equipos y reactivos:
- Sistema LC/MS/MS QTRAP® 4000/5500 (AB SCIEX).
- Sistema LC Shimadzu Prominence 20A LC, controlador del sistema CBM-20A, mezclador de 100 µL, dos bombas isocráticas LC-20AD, degasificador de tres canales, muestreador automático SIL-20AC y horno de columna CTO-20AC.
- Agua grado LC-MS, metanol, formiato de amonio.
- Columna Phenomenex 3,0 µm 110Å, Gemini C18, 50 x 2 mm
- Tubos Eppendorf de 1,5 mL.
- Centrífuga con soporte para tubos Eppendorf capaz de funcionar a 14.000 rpm.
- Pipetas y materiales estándar de laboratorio.
- Estándares de antibióticos.
