Características principales

• Cuatro pasos simples para configurar y ejecutar el análisis

• Incluye métodos para cuantificación con una integración personalizable en el catálogo MRM de 45 aminoácidos fisiológicos

• Seguridad con diferentes niveles de acceso para usuarios. El software vincula la identidad del operador con la capacidad para ejecutar tareas específicas

• Sistema de pruebas para comprobar de forma sencilla el funcionamiento del sistema LC/MS/MS

• La generación automatizada de informes se puede basar en rangos de referencia de muestras específicas e informan automáticamente los valores normalizados. Los informes se pueden guardar en un formato compatible LIMS/LIMS.

Introducción

La identificación y cuantificación de aminoácidos se realiza rutinariamente para la investigación clínica, la alimentación y el análisis de proteínas. Las muestras de interés como plasma, orina, líquido cefalorraquídeo, medios de cultivo, hidrolización de péptidos/proteínas, alimentos para animales y productos alimenticios. El software y el método para el análisis de aminoácidos deben cumplir los requisitos de cada una de estas aplicaciones. Aquí se describe el nuevo software Cliquid® AA45 que simplifica el análisis de rutina de aminoácidos.

Las pruebas de aminoácidos, han sido tradicionalmente realizadas por derivatización de ninhidrina seguida de la separación mediante HPLC con red de diodos o detección por fluorescencia. Mientras que esta técnica ofrece una sensibilidad adecuada en algunos casos, sufre de la incapacidad para separar los aminoácidos clave, (Ej: Glu de Gln), en tiempos largos de corrida (hasta 160 minutos) y la interferencia de co-liberadores de compuestos que pueden afectar la precisión cuantitativa.

Hay varias ventajas claras del análisis de aminoácidos basado en LC/MS/MS utilizando reactivos iTRAQ, a saber: un tiempo de ejecución total de menos de 12 minutos, selectividad total para aminoácidos individuales, sensibilidad en el rango de µM bajo, hasta cuatro órdenes de rango dinámico lineal y la capacidad de realizar un análisis con un mínimo de 40 µL de plasma, orina o líquido cefalorraquídeo.

Mientras la LC/MS/MS es vista como una poderosa técnica analítica y de costes efectivos, muchos laboratorios se han mostrado reacios a adoptar esta tecnología debido a la falta de operadores con experiencia y/o la dificultad percibida en el manejo de dichos equipos. El software Cliquid® AA45 para análisis de rutina de aminoácidos, simplifica el uso de LC/MS/MS para dichas pruebas.

Una interfaz de usuario intuitiva con métodos suministrados reduce la complejidad mediante la reducción de realización de las pruebas de AA a cuatro simples pasos con generación automática de informes. Ahora, incluso aquellos usuarios con poca o ninguna experiencia en LC/MS/MS, podrán obtener resultados precisos en tan sólo unas horas.

Los laboratorios que realizan análisis de rutina de aminoácidos debe ser capaces de identificar rápidamente y cuantificar con precisión una amplia gama de aminoácidos a partir de matrices complejas, evitando interferencias que puedan afectar los resultados. Construido con una interfaz intuitiva, el software Cliquid® AA45 proporciona pruebas preconfiguradas para el análisis de hasta 45 aminoácidos fisiológicos y su capacidad para utilizar el catálogo MRM incorporado para crear rápidamente nuevos ensayos.

Seguridad de usuario y página de inicio

Para mantener la seguridad y la trazabilidad, se necesita una contraseña para ingresar en el software. Una vez iniciada la sesión, la página de inicio muestra la Lista de tareas y las funciones disponibles para el usuario (Figura 1).

Hay dos niveles definidos por el usuario en el software Cliquid®. El nivel Técnico proporciona acceso a la función que permite seleccionar las pruebas y las muestras de ejecución, generación de informes de forma automática o revisión de los datos antes de la presentación de informes. El nivel Administrador proporciona capacidades adicionales de configuración incluyendo la de definir nuevas pruebas y estilos de informe. Mediante la implementación de nuevas pruebas en el Cliquid®, el sistema puede evolucionar para manejar nuevas pruebas y requisitos de información sin complejidad adicional para los técnicos.

La Lista de tareas muestra el estado de las muestras y los informes de ejecución. El panel de instrumentos en la parte inferior de la pantalla indica el estado del HPLC y el MS/MS de forma clara y fácil de interpretar. El sencillo esquema del “semáforo” de tres colores muestra el estado de los componentes del sistema, verde indica que el componente está "corriendo"; amarillo indica un componente inactivo, y el rojo indica una condición de error.

Análisis de muestras

Después de seleccionar “Run Samples” en la página principal, los siguientes cuatro pasos se guiarán al operador a través de la creación de los análisis e informes automáticos.

Paso 1: Elección de la prueba

El primer paso es elegir la prueba (Figura 2). Al elegir una prueba todos los parámetros requeridos por el HPLC y el MS/MS para realizar el análisis se cargan automáticamente.

El Cliquid® incluye tres pruebas preconfiguradas: una para el análisis de 20 aminoácidos, una para el análisis de 45 aminoácidos, y una prueba especial para determinación de allo-, iso-Ieucina y leucina.

Paso 2: Creación de una lista de muestra

El segundo paso consiste en construir la lista de muestra, especificando el nombre de la muestra, posición de la muestra, tipo de muestra (en blanco, estándar, o desconocidas).

Por otra parte, la lista de muestra se puede importar desde un archivo de texto o pegar desde cualquier aplicación basada en Windows (Figura 3).

Paso 3: Selección del formato de informe

El tercer paso consiste en identificar las opciones de formato y la entrega de los informes requeridos (Figura 4).

Están disponibles estilos de informes preconfigurados y personalizables. Las opciones de presentación de Informes incluyen guardar el informe como un documento de Word o PDF, impresión automática y/o envío por correo electrónico una vez terminado. Los informes con los resultados de detección y los resultados de búsqueda de bibliotecas se generan al instante después de la adquisición de cada muestra.

El catálogo MRM ofrece la posibilidad de crear métodos "instantáneos" simplemente haciendo clic en los compuestos a analizar.

Paso 4: Envío del trabajo

El paso final consiste en presentar la información de la muestra al sistema LC/MS/MS con el fin de iniciar el análisis. El sistema proporciona recordatorios de las condiciones para el análisis (columna, la fase móvil, la fuente de iones, etc.) y permite especificar el tiempo de equilibrio y el nombre del puesto de trabajo antes de su presentación.

Tras la presentación, la lista de trabajos en la página de inicio ofrece la posibilidad de seguir fácilmente el progreso del análisis de muestras y generación de informes. Los iconos indican si la muestra ha terminado, todavía está en curso de adquisición o a la espera de los análisis. Durante la adquisición, el orden de las muestras en espera puede ajustarse. Esto incluye la posibilidad de incluir una muestra de emergencia para que sea analizada en primer lugar.

Una vez que el análisis se completa, la tabla de resultados y el/los informe/s se generan automáticamente. Al hacer clic en el botón “View”, en la lista de informes, se mostrará el informe completo. Un informe de ejemplo se muestra en la Figura 6. El informe contiene información de la muestra, un cromatograma y una tabla resumen de todos los aminoácidos identificados junto con rango de concentración y las cantidades encontradas.

El catálogo MRM

El catálogo de MRM es una base de datos que contiene las condiciones de espectrometría de masa de los 45 aminoácidos fisiológicos. Nuevas pruebas pueden ser creadas al instante, por cualquier combinación de estos, tan solo seleccionando los compuestos deseados (Figura 5).

Además de los métodos creados con el Catálogo MRM, cualquier método que se haya desarrollado en el software Analyst®, independientemente de los compuestos objetivo, también pueden ser fácilmente añadidos al menú de prueba del Cliquid®.

Informes

El Cliquid® se suministra con un número de aminoácidos y el informe de plantillas estándar. En la figura 6 se muestra un ejemplo de un informe de aminoácidos cuyos resultados incluyen una tabla en la que los aminoácidos individuales, que se encuentran fuera de un conjunto definido de rangos, son destacados.

Además, se suministran informes estándar adicionales para la prueba de aptitud del sistema, curvas de calibración, control de calidad, etc. y estos se pueden personalizar para satisfacer requisitos específicos.

Si es necesario, el operador tiene la oportunidad de revisar la integración de cada pico y aceptar o modificar estas según sea necesario durante la re-procesamiento antes de la regeneración de un informe.

Resumen

El software Cliquid® proporciona un flujo de trabajo simple de cuatro pasos con pruebas pre-configuradas y estilos de informes para simplificar el uso del LC/MS/MS para el análisis rutinario de aminoácidos.

Estas son las principales características del Cliquid®:

• Pruebas para análisis de aminoácidos incorporadas

• Niveles de usuario que vincula la identidad de un operador a las tareas específicas que esté autorizado para llevar a cabo

• Flujo de trabajo simplificado de cuatro pasos para configurar y realizar pruebas e informar automáticamente los resultados

• Un Catálogo MRM de 45 aminoácidos para personalización fácil de métodos

• Herramientas que proporcionan la capacidad para crear o personalizar los estilos de los informes

El Cliquid® para análisis de rutina de aminoácidos está a la venta en forma independiente o como parte de una solución total que incluye el Espectrómetro de Masas de Triple Cuadrupolo AB Sciex API 3200 LC/MS/MS, un HPLC Shimadzu Prominence HPLC/UFLC o Shimadzu Nexera All In One: HPLC/UFLC/UHPLC y un kit para la puesta en marcha que contiene el software, la columna de análisis, reactivos iTRAQ, una mezcla para la prueba de aptitud del sistema, estándar internos, la instalación y capacitación.