Esta nota de aplicación demuestra el desempeño y la rápida implementación**** de un iMethod Test para la determinación de 45 aminoácidos en fluidos fisiológicos, utilizando las tecnologías de ABSciex: los iMethod, los marcadores de isotópicos selectivos a aminoácidos (iTRAQ Reagents) y la insuperable tecnología LC/MS/MS. Este método puede implementarse en cualquier modelo MS/MS de ABSciex del API 3200 en adelante. Fue desarrollado para realizar análisis de rutina de 45 aminoácidos en muestras de orina, suero y plasma. Incluye el software Cliquid AA45 2.0. Este procedimiento permite la separación de los aminoácidos isoméricos e isobáricos. Para una cuantificación exacta se utiliza un estándar interno para compensar cualquier variabilidad en la preparación de la muestra, la cual está basada en una simple precipitación y derivatización de proteínas con reactivos iTRAQ. El tiempo total de corrida es menor a 13 minutos.

Figura 1: Separación de 45 aminoácidos en menos de 13 minutos

Calibración

Las curvas de calibración se construyeron utilizando a partir de estándares múltiples obteniéndose límites de cuantificación que van de 0,5 a 10 µM, con un rango dinámico de 3 a 4,5 órdenes de magnitud.

Figura 2. Curvas de calibración representativas de serina