El sistema QTRAP® 5500 utiliza la novedosa trampa lineal basada en Linear Accelerator™, diseñada para reducir el tiempo de fragmentación y aumentar la eficiencia de excitación, llevando la performance de un experimento MRM³ (MS/MS/MS) a un nuevo nivel. Esto, junto con la elevada sensibilidad del espectrómetro de masas y la velocidad de barrido de hasta 20.000 Da/s, permite utilizar la técnica MRM³ con límites de detección menores y en ciclos más cortos que con los anteriores sistemas QTRAP®.

Detalles del método

• Cromatografía líquida utilizando un sistema Shimadzu UFLC XR con una columna Phenomenex Synergi Fusion-RP (2,5 µm) y un gradiente rápido de agua y metanol con buffer de formiato de amonio.
• Sistema AB SCIEX QTRAP® 5500 con la fuente API Turbo V™ y la sonda ESI.
• Experimento 1: detección de dos transiciones MRM con 100 ms de demora del tiempo del experimento MS/MS (MRM).
• Experimento 2: detección de dos barridos MRM³ a 20,000 Da/s con 20 ms de atrapamiento del ión (MRM) y 25 ms de fragmentación MRM³ (ciclo total: 0,33 s)

Resultados

Selectividad

Se añadieron 10 ppb de malatión a una muestra de manzana extraída según el procedimiento QuEChERS, se la diluyó 50 veces para minimizar los efectos de la matriz, y se la analizó mediante LC-MS/MS. En la Fig. 1 se muestran los cromatogramas resultantes utilizando dos transiciones MRM y dos experimentos MRM³. Mientras que la transición MRM 331/127 muestra la selectividad esperada, la segunda transición 331/99 exhibe un elevado nivel de ruido de fondo e interferencia de la matriz. En contraste, ambos experimentos MRM³ muestran una selectividad superior para una cuantificación más confiable.

Sensibilidad

En la Tabla 1 se muestra la relación señal/ruido (S/N) de los cromatogramas arriba descriptos. Los cuantificadores MRM y MRM³ muestran una sensibilidad similar. Ambos experimentos permitieron la cuantificación de malatión a niveles por debajo de la ppb.

Sin embargo, el análisis de residuos de plaguicidas requiere información confirmatoria. Por ello se necesita una segunda señal MRM o MRM³ para el cálculo de la relación (cualificador/cuantificador). En el ejemplo, el segundo MRM muestra una significativa pérdida de S/N debido al elevado ruido de fondo, dificultando la cuantificación y confirmación de malatión en la matriz de fruta. Este problema no existen al utilizar MRM³ .

Reproducibilidad

La técnica MRM³ en trampas de iones tradicionales y sistemas QTRAP® requiere demasiado tiempo. Normalmente esto es causa de una menor exactitud y reproducibilidad. El sistema QTRAP® 5500 junto con la nueva trampa Linear Accelerator™ puede realizar experimentos MRM³ mucho más rápido que cualquier otra trampa de iones. Por ejemplo, el método utilizado en este estudio realiza dos barridos MRM³ en un ciclo de sólo 0,33 s, lo que permite ~15 mediciones para describir los picos UHPLC con un ancho de base a base de sólo 5 seg.

Se analizan múltiples muestras de frutas con 10 ppb de malatión y se analizan por duplicado. Mientras que la detección MRM sufre de interferencia de la matriz, con MRM³ se obtienen datos de mayor exactitud y reproducibilidad. Los valores de %CV en damasco, manzana, pera y naranja son de <5 % con una exactitud de 90–110 %. Además, la relación de transiciones MRM³ confirma claramente la presencia de malatión en las muestras de frutas.

Resumen

Se han desarrollado métodos LC-MS/MS para cuantificar y confirmar el plaguicida organofosforado malatión en muestras de frutas utilizando el nuevo sistema QTRAP® 5500. Estos métodos aplican el tradicional MRM y el barrido MRM³. Uno y otro fueron comparados en términos de selectividad, sensibilidad, exactitud y reproducibilidad. Los resultados muestran que la mayor selectividad del barrido MRM³ elimina el ruido de fondo y la interferencia de la matriz, y por lo tanto arroja datos de mejor calidad. Los resultados son similares en cuanto a la señal de cuantificación, pero una vez más el MRM³ ofrece mucha mejor sensibilidad, exactitud y reproducibilidad para la señal de cualificación en la matriz de fruta.

MRM	S/N	MS/MS/MS	S/N
331/127	922	331/127/99	497
331/99	8 (high background)	331/99/71	147